|
Bir Rekombinant protein, başka bir organizmadan izole edilmiş bir rekombinant gen (hedef gen) ile transfekte edilmiş bir ekspresyon konakçı organizması, diğer bir deyişle ekspresyon sistemi tarafından yapay olarak üretilen bir proteindir. Tıbbi ve akademik araştırmalar için fazla miktarlarda rekombinant gen kodlu proteini üretmek amacıyla kullanılmaktadır.
İfade Sistemleri
E. Coli, maya, Sf21 gibi böcek hücre dizileri, CHO, HEK gibi memeli hücreleri ve insan hücre dizileri gibi rekombinant proteinlerin üretilmesi için birkaç yaygın ifade sistemi vardır. Bu ifade sistemleri, rekombinant protein üretimi için vektördeki rekombinant geni şablon olarak kullanır ve hedef protein üretiminde fabrika görevi görür. E. Coli, ekspresyon sistemi olarak kullanılan ilk organizmadır. Kullanımı kolaydır, ancak proteinlerin post-translasyon modifikasyonu (PTM) için gerekli olan ökaryotik hücrelerin hücresel mekanizmalarından yoksun olduğu için PTM ile protein üretemez. Bu nedenle, basit proteinlerin üretilmesi ve proteinlerin PTM'ye sahip olmasını gerektirmeyen uygulamalar için E. Coli yeterli ve uygun bir ifade sistemidir, ancak daha karmaşık uygulamalar için daha gelişmiş ifade sistemleri gereklidir.
İfade Vektörleri
Vektör, DNA'yı manipüle etmek için bir araç ve ilgilenilen proteinin geni için taşıma aracıdır. Birçok vektör türü vardır, bazı yaygın vektörler plazmitler ve ters transkripsiyon virüsleridir. Proteini kodlayan DNA, önce in vitro sentezlenir veya doğal konakçı DNA şablonlarından klonlanır, ardından vektör DNA'sına eklenir. Konak organizma vektörleri almak için işlenir. Bu vektörler, karşılık gelen konakçı hücrelere girdikten sonra kopyalanacak ve proteinlere çevrilecektir.
|
